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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
我公司提醒廣大實(shí)驗(yàn)家們在操作步驟過程中的幾個(gè)必知項(xiàng)目有:
1. 溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
2. 將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
3. 洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
4. 洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫6作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
5. ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中,液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
6. ELISA試劑盒曲線問題:
(1)OD值不正常
(2)白板
(3)無梯度
(4)線性不好
為了提高ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的度,廣大實(shí)驗(yàn)家們一定嚴(yán)格遵守每一個(gè)步驟,為了中國生物事業(yè)的騰飛,我們將攜手共進(jìn),共創(chuàng)輝煌!