ELISA試劑盒出現(xiàn)問題有關(guān)知識

1、問：做直接ELISA試劑盒法檢驗(yàn)小鼠血清中的IgE抗體，設(shè)空白對照、和陰性對照、陽性血清稀釋倍數(shù)為5千、1萬、10萬、20萬不等，用的是生物素符號的羊抗鼠IgE抗體，和親和素的辣根過氧化物酶。但是效果除了空白對照孔沒有顏色外，別的各孔全有顏色，并且OD值都相差不大，為何?
答復(fù)：也許因素如下：
(1) 水質(zhì)被金屬離子等污染;防止辦法盡量運(yùn)用新鮮水或蒸餾水。
(2) 洗刷不充沛，樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗刷液應(yīng)注滿微孔，充沛洗刷。
(3) 移液頭重復(fù)運(yùn)用，未洗凈或消毒不*; 防止辦法移液頭一次性運(yùn)用。
(4) 酶標(biāo)板靈敏度過高。
(5) 一抗顯色時(shí)間的控制等等，對于ELISA的每一步都要留心才行。
2、ELISA試劑盒加樣時(shí)的防錯(cuò)小經(jīng)驗(yàn)
(1)用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報(bào)紙，墊在下面，這么，加過標(biāo)本的小孔看過去下面的字會變小，沒加的字正常，非常簡略差異。
(2)可以運(yùn)用液面反光與沒有加的孔加以差異
(3)在標(biāo)本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面發(fā)作小氣泡，也可以加以差異
3、棋盤ELISA試劑盒試驗(yàn)的操作辦法:
(1)將抗原按一定的梯度倍比稀釋后，按照ELISA從上到下(或許從左到右)的次第包被。
(2)將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA從左到右或許從上到下參加。
(3)二抗的稀釋倍數(shù)是一定的，然后顯色，讀值。
ELISA試劑盒OD值的測守時(shí)，波長要根據(jù)顯色劑的不一樣而定，通常上我們都運(yùn)用TMB顯色，450nm讀值。根據(jù)讀值得效果可以選定適合的抗原和抗體效價(jià)，這即是棋盤 ELISA試劑盒試驗(yàn)的目的，假設(shè)抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話就用一抗和二抗作棋盤試驗(yàn)。