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ELISA試劑盒的溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí),試驗(yàn)標(biāo)明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1~2小時(shí),產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。為加快反響,可進(jìn)步反響的溫度,有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,但不宜選用更高的溫度。但因所需時(shí)刻太長,在ELISA試劑盒中一般不予選用。
ELISA試劑盒實(shí)踐進(jìn)程操作技巧:
1)加樣器應(yīng)筆直參加標(biāo)本,防止刮擦包被板底部,加樣進(jìn)程中防止液體外濺,血清殘留在反響孔壁上。
2)加樣器吸頭要清洗干凈,防止污染,加樣次第要與說明書共同,否則可導(dǎo)致成果過錯(cuò),試驗(yàn)重復(fù)性差。
3)在進(jìn)行試驗(yàn)前應(yīng)對試驗(yàn)的物理參數(shù)有充沛的了解,如環(huán)境溫度、反響孵育溫度和孵育時(shí)刻、洗刷的次數(shù)等,要先檢查水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。
4)顯色液量不行過多,加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,加顯色體系后要避光反響,顯色液量不能過多,防止顯色過強(qiáng)。
5)要確保加液量共同,在使用時(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量禁絕,造成顯色不一致,判別過錯(cuò)。
ELISA試劑盒試驗(yàn)水浴保溫辦法:
1、可將ELISA試板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度敏捷平衡。
2、為防止蒸騰,板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,可讓反響板漂浮在水面上。
3、濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。
4、操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi),規(guī)范室溫溫度是指20~25℃,但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求控制溫育。
5、若用保溫箱,應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui終將ELISA板放在濕紗布上。
6、室溫溫育時(shí),只要平置于操作臺(tái)上即可。
7、無論是水浴還是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度都能敏捷平衡。
8、應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求。
9、為確保這一點(diǎn),一個(gè)人操作時(shí),一次不宜多于兩塊板一起測定。
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以上是ELISA試劑盒試驗(yàn)水浴保溫辦法與操作技巧,希望可以幫助到大家。