上海研域生物操作常見細胞培養(yǎng)實驗

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細胞系（cell line）指原代細胞培養(yǎng)物經傳代成功后所繁殖的細胞群體。 也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。（由此便引申出了后來的有限細胞系（FiniteCellLine）、無限細胞系（InfiniteCellLine）），因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞（特定環(huán)境下口語和書面語都使用），廣義是指可傳代的細胞。

細胞傳代：

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000rpm離心5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1：2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000rpm條件下離心4min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

復蘇細胞：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000rpm條件下離心3min，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

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