服務(wù)熱線(xiàn)
021-54479081
021-54461587
人瘦素ELISA 檢測(cè)試劑盒
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本:血清或血漿
試驗(yàn)原理:
Leptin試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知Leptin濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將Leptin和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Leptin的濃度呈比例關(guān)系。
自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人瘦素ELISA 檢測(cè)試劑盒
操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
洗滌緩沖液(50×)的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。
人瘦素ELISA 檢測(cè)試劑盒
操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線(xiàn)性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)無(wú)法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線(xiàn)性。樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
人瘦素ELISA 檢測(cè)試劑盒
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的Leptin標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線(xiàn),樣品的Leptin含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測(cè)值范圍:0-40nmol/L
4、敏感度: 0.1 nmol/L
Naphthalene-1,5-disulfonic acid tetrahydrate 1,5-萘二磺酸四水 [81-04-9] 50g
Naphthalene-1,5-disulfonic acid disodium salt 1,5-萘二磺酸二鈉鹽 [1655-29-4] 100g
Naphthalene-2,6-disulfonic acid disodium salt 2,6-萘二磺酸二鈉鹽 [1655-45-4] 100g
1-Naphthalene ethanol 1-萘乙醇 [773-99-9] 25g
2-Naphthalene ethanol 2-萘乙醇 [1485-07-0] 5g
1-Naphthalenesulfonic acid 1-萘磺酸 [85-47-2] 100g
1-Naphthoic acid 1-萘甲酸 ( alpha-萘甲酸) [86-55-5] 100g
2-Naphthoic acid 2-萘甲酸 [93-09-4] 25g
1-Naphthol 1-萘酚 [90-15-3] 100g
1-Naphthol 1-萘酚 [90-15-3] 500g
2-Naphthol 2-萘酚 [135-19-3] 100g
2-Naphthol 2-萘酚 [135-19-3] 500g
Naphthol AS acetate 色酚AS醋酸鹽 [1163-67-3] 1g
Naphthol AS-BI phosphate 萘酚AS-BI磷酸鹽 [1919-91-1] 250mg
Naphthol AS-MX phosphate 萘酚AS-MX磷酸酯 [1596-56-1] 500mg
Nile blue A 耐爾藍(lán)A [3625-57-8] 25g
Nile Blue chloride 氯化尼羅蘭 [2381-85-3] 25g
Nile red 尼羅紅 [7385-67-3] 10g
Ninhydrin 茚三酮 [485-47-2] 100g
Nitrazine yellow 硝氮黃 [5423-07-4] 25g
Naphthol AS-MX phosphate 萘酚AS-MX磷酸酯 [1596-56-1] 1g
Naphthol AS-MX phosphate 萘酚AS-MX磷酸酯 [1596-56-1] 5g
Naphthol AS-MX phosphate disodium salt nonahydrate 萘酚AS-MX磷酸酯二鈉鹽九水 [36889-52-8] 250mg
2-Naphthol-3,6-disulfonic acid disodium salt 2-萘酚-3,6-二磺酸二鈉 [135-51-3] 500g
2-Naphthol-6-sulfonic acid potassium salt 2-萘酚-6-磺酸鉀 [833-66-9] 250g
β-Naphthoxyacetic acid β-萘氧乙酸 [120-23-0] 100g
β-Naphthoxyacetic acid β-萘氧乙酸 [120-23-0] 500g
β-Naphthoxyacetic acid sodium salt (a) β-萘氧乙酸鈉 [10042-71-4] 100g
β-Naphthoxyacetic acid sodium salt (a) β-萘氧乙酸鈉 [10042-71-4] 500g
1-Naphthylacetamide 1-萘乙酰胺 [86-86-2] 100g
1-Naphthylacetamide 1-萘乙酰胺 [86-86-2] 500g
1-Naphthyl acetate 乙酸-1-萘酯 [830-81-9] 5g
2-Naphthyl acetate 乙酸-2-萘酯 [1523-11-1] 5g
1-Naphthylamine 1-萘胺 [134-32-7] 25g
2-Naphthylamine 2-萘胺 [91-59-8] 10g
2-Naphthylamine 2-萘胺 [91-59-8] 25g
1-Naphthyl butyrate 1-丁酸萘基酯 [3121-70-8] 1g