安全性: 1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。 2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。 3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。 試劑的準(zhǔn)備: 1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行: 80 ng/ml | (6號標(biāo)準(zhǔn)品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 | 40 ng/ml | (5號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 20 ng/ml | (4號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 10 ng/ml | (3號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 5.0 ng/ml | (2號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 2.5 ng/ml | (1號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 0 ng/ml | (空白對照) | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 | 2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。 試劑盒性能: 1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。 2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。 3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。 | | 操作步驟: 1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。 2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。 3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。 4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。 5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。 6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。 7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。 8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。 9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。 結(jié) 果 判 斷 與 分 析: 1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值 2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的Prolactin標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的Prolactin含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度, 再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。 3、檢測值范圍:0-80ng/ml 4、敏感度: 0.1 ng/ml |